कोरोना वायरस का प्रकोप सबसे पहले चीन के वुहान शहर में देखा गया था। यह प्रकोप तब सामने आया, जब WHO ने COVID-19 बीमारी को महामारी घोषित किया। COVID-19, SARS CoV वायरस के कारण होता है। 29 मई 2020 तक, 5.9 मिलियन लोग वायरस से प्रभावित हुए थे, और 362 हज़ार से ज़्यादा मौतें दर्ज की गई थीं। दुनिया के कई देश इस बीमारी के फैलाव को नियंत्रित करने के लिए संघर्ष कर रहे हैं।
आज तक, कोई ख़ास दवा या इलाज नहीं है, जिसका उपयोग बीमारी के इलाज के लिए किया जा सके। परीक्षण प्रक्रियाओं के लिए दुनिया भर में कई सिद्धांत लागू किए जा रहे हैं, वायरस की उपस्थिति का परीक्षण करने के लिए अलग-अलग प्रक्रियाएँ सामने आईं। दुनिया भर के देशों द्वारा विभिन्न नैदानिक परीक्षणों की माँग में बढ़त हुई है।
रोग नियंत्रण और रोकथाम केंद्र (CDC) ने परीक्षण के तरीकों को दो श्रेणियों में वर्गीकृत किया। परीक्षण में निम्नलिखित तरीक़े शामिल हैं - वायरल परीक्षण और एंटीबॉडी परीक्षण। वायरल परीक्षण - वायरस की उपस्थिति का पता लगाने के लिए, इसमें rt-PCR, आइसोथर्मल न्यूक्लिक एसिड एम्प्लीफिकेशन, एंटीजन टेस्ट आदि जैसे तरीक़े शामिल हैं। एंटीबॉडी परीक्षण - संक्रमण के लिए एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के रूप में उत्पादित एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए।
वायरल परीक्षण:
वायरल परीक्षण विधि में नमूनों के संग्रह के लिए स्वाब किट का उपयोग शामिल है। SARS CoV-2 वायरस की उपस्थिति की जाँच के लिए आपके श्वसन तंत्र से नमूना लिया जाता है। परिणाम प्राप्त करने में 1-2 दिन लगते हैं, परीक्षण किट को विश्लेषण और व्याख्या के लिए प्रयोगशालाओं में भेजा जाता है।
RT-PCR (रियल टाइम पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली विधि है। SARS CoV वायरस में आनुवंशिक सामग्री के रूप में आरएनए होता है। व्यक्तियों से नमूने (ऑरोफेरींजियल / नासॉफ़ेरींजियल) एकत्र किए जाने के बाद, आरएनए को निकाला जाता है और RT-PCR परख के लिए उपयोग किया जाता है। RT-PCR विधि एक प्रभावी तकनीक है, जिसमें एक स्वचालित, उच्च-थ्रूपुट वर्कफ़्लो, विश्वसनीय उपकरण हैं और यह एक पसंदीदा विधि बन गई है।
एंटीबॉडी परीक्षण:
एंटीबॉडी परीक्षण का उपयोग उन लोगों के प्रतिशत को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है, जिन्होंने इस बीमारी को अनुबंधित किया है और इसलिए इसे प्रतिरक्षा माना जाता है। हालाँकि, इस बात का कोई सबूत नहीं है, जो यह साबित करता है कि कोई व्यक्ति एंटीबॉडी विकसित होने के बाद भी बीमारी के प्रति प्रतिरक्षित है। परीक्षण में एक प्लेट पर वायरल प्रोटीन (SARS COV2 वायरस के इस मामले में, स्पाइक प्रोटीन) कोटिंग शामिल है। एकत्र किए गए नमूने फिर वायरल प्रोटीन पर लागू होते हैं, और यदि रोगी के पास वायरल प्रोटीन के लिए एंटीबॉडी होते हैं, तो वे एक साथ जुड़ते हैं। एंटीबॉडी-एंटीजन बाउंड का पता फिर एंटीबॉडी के एक और धोने के साथ लगाया जा सकता है, जो एक ऐसा रंग उत्पन्न करता है, जिसे फ्लोरेसेंस में देखा जा सकता है।
एंटीबॉडी परीक्षण के लाभ:
- एंटीबॉडी परीक्षण एक त्वरित तरीका है और इसे COVID के लिए फर्स्ट-लाइन स्क्रीनिंग के रूप में उपयोग किया जाता है, ताकि बड़े पैमाने पर परीक्षण करके जनसंख्या-व्यापी स्क्रीनिंग को सक्षम किया जा सके।
- यह सरकार/संगठन को वायरस के फैलाव की सही सीमा को समझने में मदद करता है।
- संगठनात्मक निगरानी के दौरान एंटीबॉडी परीक्षण भी उपयोगी है। बिना लक्षण वाले व्यक्तियों (जो वायरस से संक्रमित हैं) की पहचान एंटीबॉडी परीक्षण के माध्यम से की जा सकती है।
- एंटीबॉडी परीक्षण के अन्य लाभ हैं कॉन्वालसेंट प्लाज्मा डोनर (चिकित्सा के लिए) का चयन और टीकों के लिए मेज़बान प्रतिक्रिया का मूल्यांकन।
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इंडियन काउंसिल ऑफ मेडिकल रिसर्च (ICMR) और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ वायरोलॉजी (NIV) ने घोषणा की कि कोरोना वायरस का पता लगाने के लिए एलिसा टेस्ट का इस्तेमाल किया जा सकता है। वैज्ञानिकों ने SARS CoV-2 के लिए एंटीबॉडी डिटेक्शन के लिए स्वदेशी IgG ELISA टेस्ट विकसित किया है। एंटीबॉडी परीक्षण किट का मुंबई में परीक्षण किया गया और उनमें उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता पाई गई।
एलिसा परीक्षण क्या है?
एंजाइम लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट ऐसे (ELISA) एक सेरोलॉजिकल टेस्ट (ब्लड टेस्ट) आधारित टेस्ट है, जिसका उपयोग यह पता लगाने के लिए किया जा सकता है कि कोई व्यक्ति COVID के संपर्क में है या नहीं। एलिसा एक अत्यधिक संवेदनशील परीक्षण है, जो रक्त में एंटीबॉडी, न्यूरोबायोलॉजिकल विश्लेषण, साइटोकिन्स और अन्य प्रतिरक्षा कोशिकाओं की उपस्थिति का पता लगाता और मापता है। एंटीबॉडी शरीर द्वारा उत्पादित प्रतिरक्षात्मक प्रोटीन होते हैं, जो शरीर में प्रवेश करने वाले विभिन्न रोगजनक एंटीजन की प्रतिक्रिया में होते हैं।
एलिसा क्यों और यह अन्य नैदानिक परीक्षणों से कैसे भिन्न है?
वर्तमान में उपयोग किया जाने वाला RT-PCR, COVID के लिए नैदानिक निदान का सबसे प्रमुख तरीक़ा है, निदान वायरस की उपस्थिति को मान्य करता है, यदि कोई हो। परीक्षण बाद में व्यक्ति के संक्रमण और ठीक होने के बारे में रिपोर्ट नहीं करता है। नमूनों के संग्रह के लिए विशेषज्ञता की आवश्यकता होती है।
एंटीबॉडी परीक्षण एलिसा परीक्षण के समान बुनियादी सिद्धांत पर काम करता है। परिणाम प्राप्त करने में 2-5 घंटे लगते हैं। एलिसा परीक्षण आबादी में बीमारी की आवृत्ति को जानने में मदद करता है। यह परीक्षण IgG एंटीबॉडी की उपस्थिति का पता लगाता है। IgG-ELISA, SARS-CoV2 की उपस्थिति का पता लगाने के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस का एक उपयोगी विकल्प प्रदान करता है।
विश्व स्वास्थ्य संगठन (WHO) उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के कारण अन्य एंटीबॉडी परीक्षणों की तुलना में एलिसा परीक्षण की सिफारिश करता है। यह परीक्षण विशेष रूप से निगरानी उद्देश्यों के लिए डिज़ाइन किया गया है, एक बार में बड़ी संख्या में नमूनों की स्क्रीनिंग करता है।
एलिसा का मूल सिद्धांत:
एलिसा पॉलीस्टाइनिन माइक्रोटीटर प्लेटों में किया जाता है। इन प्लेटों में 96 कुएँ या 384 कुएँ होते हैं। एलिसा परीक्षण में उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मक स्थिर होते हैं, जो प्रक्रिया को करना आसान बनाते हैं। परख में एक मोनोक्लोनल एंटीबॉडी कोट (IgM, IgG एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है) होता है। सबसे पसंदीदा एंटीबॉडी IgG है, जिसे माइक्रोटीटर प्लेट पर एंजाइम के साथ बंधन करते समय अन्य प्रोटीन से हस्तक्षेप से बचने के लिए संयुग्मन में शुद्ध और उपयोग किया जाता है। जब रक्त के नमूने जोड़े जाते हैं, तो प्राथमिक एंटीबॉडी प्रोटीन का पालन करती है।
एक द्वितीयक एंटीबॉडी प्रोटीन पर एक अलग एपिटोप को बांधती है। परख को बायोटिन के साथ लेबल किया जाता है, जो स्ट्रेप्टाविडिन-संयुग्मित एंजाइम (आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले एंजाइम हॉर्सरैडिश पेरोक्सिडेज और क्षारीय फॉस्फेटेज हैं) जैसे प्रोटीन के बाद के बंधन की अनुमति देता है। कोई भी बिना बंधन वाला सीरम घटक या अभिकर्मक प्लेटों को अच्छी तरह से धोकर समाप्त कर दिया जाता है, पीबीएस-टी (फॉस्फेट बफर्ड सलाइन के साथ ट्विन20) का उपयोग आमतौर पर पतला के रूप में किया जाता है, किसी भी बिना बंधन वाले अणुओं को हटाने के लिए।
एक क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट (जो एंजाइमैटिक प्रतिक्रिया के आधार पर एक रंग विकसित करता है) का उपयोग दागने के लिए किया जाता है। दागने के लिए टेट्रामेथाइलबेन्जिडाइन (TMB) जैसे सब्सट्रेट का उपयोग किया जाता है। सब्सट्रेट का चुनाव अधिकतर उपयोग किए गए उपकरण (स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, फ्लोरोमीटर और ल्यूमिनोमीटर) के प्रकार पर निर्भर करता है। एंजाइम में एक फ्लोरोसेंट टैग होता है, जो सब्सट्रेट को एक ऐसे उत्पाद में परिवर्तित करता है, जिसका पता फ्लोरोमीटर द्वारा लगाया जा सकता है। प्रोटीन की सांद्रता ज्ञात प्रोटीन सांद्रता के मानक वक्र द्वारा निर्धारित की जाती है। मानक, नियंत्रण और नमूनों के लिए माध्य अवशोषण की गणना की जाती है। मानक वक्र Y अक्ष पर माध्य अवशोषण बनाम X अक्ष पर सांद्रता या कंप्यूटर सॉफ़्टवेयर प्रोग्राम का उपयोग करके प्लॉट करके बनाया जाता है। ऑप्टिकल घनत्व को एलिसा प्लेट रीडर का उपयोग करके विभिन्न तरंग दैर्ध्य पर मापा जा सकता है।
तो एक प्रयोगशाला में एलिसा कैसे किया जाता है? क्या परिणाम फूलप्रूफ हैं? सकारात्मक / नकारात्मक परिणाम का क्या मतलब है? भाग 2 के लिए बने रहें - जहाँ आप इस विधि के पीछे के विज्ञान के बारे में सब कुछ पढ़ सकते हैं।
